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人结肠癌紫杉醇耐药株的传代方法介绍
更新时间：2016-08-26 点击次数：1247次
人结肠癌紫杉醇耐药株传代方法：
收到细胞后，在倒置镜下(是在4X物镜)观察整个人结肠癌紫杉醇耐药株生长情况。
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换10ml新鲜培养液后继续培养。
(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
1.弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量*培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加*培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的*次传代一般是一传二。
注：1、观察细胞在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。
2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。
3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。
4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。
