实时荧光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR，RTFQPCR)是1996年由美国AppliedBiosystems公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
　　
　　检测指标是：各样品的目的基因和管家基因分别进行RealtimePCR反应。PCR产物与DNALadder在2%琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
　　
　　实时荧光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
　　
　　实时荧光定量PCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。
　　
　　实时荧光定量PCR的广泛应用：
　　
　　•可以对各种基因的表达进行定量分析，如：同一基因在不同组织中的表达差异、同一基因在不同药物处理后的表达差异、转基因食品的检测。过去zui常用的高通量筛选基因表达差异的技术是cDNA芯片和差异显示，但这两种技术的缺点是只能定性而非完整意义上的定量分析。实时PCR技术和高通道实时PCR仪的出现，无疑为这种检测提供了极大的方便。
　　
　　•可以进行点突变分析和等位基因分析，用不同的荧光报告基团标记Taqman探针，然后分别与野生型和突变型杂交，如果一种荧光信号明显强于另一种荧光信号，则表明它是纯合子；如果两种荧光信号都明显增强，则表明它是杂合子。另外分子信标（MolecularBeacon）就是专门为这种技术设计的探针。
　　
　　•可以进行单核苷酸多态性的分析，检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义，因分子信标结构的巧妙性，一旦SNP的序列信息是已知的，采用这种技术进行高通量的SNP检测将会变得简单而准确。
　　
　　•可以进行DNA甲基化检测，DNA甲基化同人类的许多疾病有关，特别是癌症，Laird报道了一种称作Methylight的技术，在扩增之前先处理DNA，使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影响，用特异性的引物和Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的DNA，这种方法不仅方便而且灵敏度更高。
　　
　　•对传染性疾病进行定量定性分析，这在我国应用比较广泛，大家比较熟悉。许多生产临床PCR试剂的厂商已经陆续推出了一系列的诊断试剂，如：肝炎系列、性病系列、肿瘤系列等等。
　　
　　•闪晶生物同时提供药物伴随诊断(companiondiagnostic)方法如EGFR、BRAFV600E突变、HER2扩增、BCR-Abl、PML-RAR、ALK融合基因等。