乳腺癌耐药细胞株是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定
乳腺癌耐药细胞株.
乳腺癌耐药细胞株的脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天.脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株.病毒转染得到稳定乳腺癌耐药细胞株的效率高,只是步骤繁琐.
技术原理稳定表达细胞株（稳转细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转乳腺癌耐药细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。用转染质粒或病毒侵染的方法将构建好的含靶基因的载体导入细胞，根据不同的基因载体中所含的抗性标志选用相应的药物进行筛选混合阳性克隆。在阳性混合克隆的基础上，得到单细胞长出的阳性单克隆，继而得到稳定转染乳腺癌耐药细胞株。常用的真核表达载体的抗性标志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。
