蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即
WesternBlot。WesternBlot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
蛋白质印迹WesternBlot的一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克(GeorgeStark)。在尼尔·伯奈特(NealBurnette)于1981年所著的《分析生物化学》(AnalyticalBiochemistry)中被称为WesternBlot。蛋白免疫印迹(WesternBlot)是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用*种方法,发表文章通常是用底物化学发光ECL。WesternBlot只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理如下(二抗用HRP标记):反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,可使胶片曝光,就可洗出条带。
免疫印迹(WesternBlot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。WesternBlot是检测单一细胞蛋白表达量的方法;若要对表达蛋白进行细胞定位,confocal应是的方法,若要进行蛋白相互作用的关系,应考虑免疫共沉淀技术。