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MTT检测细胞增殖凋亡的检测原理是什么
更新时间:2018-03-26 点击次数:1618次
   MTT检测细胞增殖凋亡细胞坏死和凋亡是两种截然不同的细胞学现象,二者发生的过程在形态学上有很大的区别。在细胞坏死时,细胞膜发生渗漏,细胞内容物包括细胞器及染色质释放到胞外。而在细胞凋亡过程,起始阶段,染色质固缩、分离并沿核膜分布,细胞质亦发生固缩,但细胞膜依然完整未失去选择透性;MTT检测细胞增殖凋亡在凋亡后期,核染色质断裂为大小不等的片断,与某些细胞器如线粒体一起聚集,为反折的细胞膜包围,后逐渐分离,形成凋亡小体。
  
  MTT检测细胞增殖凋亡MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在540或720nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
  
  MTT检测细胞增殖凋亡本身就是可以检测细胞增殖的,你作细胞增殖方面的研究是要有阴性对照和阳性对照的,比如我们做脾淋巴细胞增殖实验是用CONA作为阳性对照,而阴性对照是只加细胞的培养孔,在铺96孔板是加100ul细胞悬液,然后把检测的药物和CONA(分别是100ul,用培养基稀释的)加进去,阴性对照就是加10ul培养基即可,等到作用48小时加MTT,每孔20ul,等MTT作用4小时,可以用SDS裂解过夜,然后用酶标仪检测OD值,增殖指数=样品OD/阴性对照OD,如果大于1,说明有促进细胞增殖作用,我们实验室已经用这种方法筛选到几种有免疫增强作用的糖类啦,现在动物实验都做啦,效果很不错。
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