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原位杂交的相关原理知识介绍
更新时间:2018-10-24 点击次数:957次
  
  
  原位杂交是在DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术,两条核苷酸单链片段,利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。我们为客户提供的探针均经过临床验证。
  
  原位杂交是用于定位固定组织和细胞中特定核酸靶标的强大技术,能够获得与基因表达和遗传位点相关的时间和空间信息。虽然原位杂交的基本工作流程与印迹杂交近似,即核酸探针被合成、标记、纯化和特异性靶标退火,但其不同之处在于前者可通过可视化显示组织内的结果来获得更多信息。如今有两种基本方法来实现可视化显示原位RNA和DNA靶标,即荧光(FISH)和显色(CISH)检测。每种检测方法本身的特点使得FISH和CISH适用于截然不同的应用。虽然两种方法均使用标记的、与样本杂交的靶标特异性探针,但每种方法用于可视化显示样本的仪器不同。
  
  原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物。
  
  原位杂交的应用:
  
  ①细胞特异性mRNA转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;
  
  ②感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测;
  
  ③癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测;
  
  ④基因在染色体上的定位;
  
  ⑤检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等;
  
  ⑥分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定,某些肿瘤的诊断和生物学剂量测定等。
  
   
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