蛋白质印记（Western Blot）又称免疫印迹（immunoblotting），是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术，常用于鉴定蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
　　
　　技术优势
　　
　　高分辨率的电泳技术：聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamidegel，PAGE）把分子筛作用和电荷效应结合在同一方法中，达到更高的灵敏度。
　　
　　特异敏感的抗原-抗体反应：抗原抗体的结合实质上是抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原与抗体的结合具有高度的特异性。
　　
　　1-5ng中等大小的靶蛋白：可检测到低至1～5ng（低可到10～100pg）中等大小的靶蛋白。
　　
　　Western Blot实验注意事项
　　
　　1、把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上；
　　
　　a.转移缓冲液洗涤凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回滚动去除所有的气泡
　　
　　b.在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸（预先用转移缓冲液浸湿），将凝胶夹在中间，保持湿润和没有气泡
　　
　　c.将此滤纸/凝胶/薄膜滤纸按照厂家建议方法放入电泳装置中，凝胶面向阴极
　　
　　d.将上述装置放入缓冲液槽中，并灌满转移缓冲液以淹没凝胶
　　
　　e.按照厂家所示接通电源开始电泳转移
　　
　　f.转移结束后，取出薄膜和凝胶，弃去凝胶
　　
　　2、将薄膜漂在氨基黑中快速染色，直至分子量标准显现时取出，记录下标准位置；
　　
　　3、用100ml水洗涤纤维素膜，必要时可用脱色缓冲液；
　　
　　4、膜置印迹缓冲液中于37℃保温1小时；
　　
　　5、室温下，用PBS-Tween缓冲液洗涤薄膜
　　
　　6、用封口机将薄膜封入塑料袋中，尽可能不留空气；
　　
　　7、袋的一角剪一缓冲液的小口，用透析袋夹紧；
　　
　　8、混合：NGS(100微升)，印迹缓冲液中的抗体（2.5-5毫升），加在装薄膜的袋中，于室温下摇动2小时（或4℃过夜）；
　　
　　9、用总体积300mlPBS-Tween缓冲液，分4次在一浅盘中洗涤薄膜，每次75ml；
　　
　　10、将连接生物素的羊抗兔IgG（40微升溶于10毫升印迹缓冲液/100微升NGS）加在袋内，于室温下摇动1小时；
　　
　　11、按步骤9洗涤；
　　
　　12、加入抗生素蛋白-HRP（40微升溶于10毫升印迹缓冲液/100微升NGS），于室温下摇动；
　　
　　13、Western Blot中转移在膜上的蛋白处于变性状态，空间结构改变，因此那些识别空间表位的抗体不能用于Western Blot检测。这种情况可以将表达目的蛋白的细胞或细胞裂解液中的所有蛋白先生物素化，再用酶标记亲和素进行Western Blot。实验中取胶和膜需带手套。