原位杂交是在分子生物学领域应用极为广泛的实验技术之一,是在研究生物体发育过程中的一种极为重要的分子遗传学的研究方法。随着分子生物学技术的不断发展,在分子病理和科学研究方面得到了日益广泛的推广和应用。在原位杂交和FISH实验中,变性温度是至关重要的环节,也是确保实验成功的关键步骤。原位杂交仪可以根据实验者的设置,自动完成变性和杂交过程。严格的温度控制,适宜的湿度环境,加上低廉的成本,和时间上的节省,为分子水平的研究提供了可靠的保证。
原位杂交主要是基于以下这个主要原理:单链的DNA或者RNA只要他们的序列是互补的,即符合AT,CG的碱基配对原则,那么这样的两条核酸链之间(DNA-DNA,DNA-RNA,RNA-RNA)就可以形成一个稳定的杂交复合体。这一原理对于检测一个特异的mRNA在某一种生物体,或者某些组织切片、单个细胞里具体表达位置非常有用。该技术zui早应用于60年代末期,由于核酸分子杂交的特异性高,因此该技术已被广泛应用,例如与细胞内RNA进行杂交以观察该组织细胞中特定基因表达水平。
荧光原位杂交则是在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记的原位杂交方法,是利用荧光标记的DNA探针来检测在细胞、组织和肿瘤的特定DNA序列的分子诊断技术。首先将样本DNA变性,加入特定的荧光标记的探针与变性的样本混合进行杂交,退火得到双链DNA。探针信号能够被荧光显微镜捕获,从而定性、定量地检测目标DNA。与其它用于研究染色体的技术不同,FISH操作灵活,不需要在正在分裂的细胞进行检测,因而能够用来检测基因或染色体是否异常,通常用于遗传咨询,医学和品种鉴定、DNA特定功能研究。利用FISH方法还可检测非整倍体,微缺失综合征以及基因重排等,这些指标对遗传性疾病,如白血病,淋巴瘤,实体瘤,自闭症等发育综合征有重要的临床意义。