荧光定量PCR技术,顾名思义,就是在PCR的基础上加入荧光基团,通过荧光信号的变化的实时监测PCR的反应过程,zui后通过对未知模板进行定量分析的方法。
目前,荧光定量PCR已成为不同样品间进行基因表达水平定量差异比较的权wei性方法。在过去十几年中,该方法迅速流行,涉及科学的多个领域。
DNA有着双螺旋结构,当温度达到95摄氏度时,双链的DNA会分解成为单链状态,而在温度到达72摄氏度左右时,DNA聚合酶会沿着磷酸到五碳糖的方向进行合成。聚合酶链反应PCR就是通过不断地调节温度,以数量级的速度增加DNA数量的方法。而荧光定量PCR是指,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。
PCR技术已经广泛应用于生物医药食品等行业,应用于疾病的早期诊断、遗传病的早期诊断、药物研究、肿瘤的诊断与研究、食品病原微生物的检测、转基因食品检测、动物疫病检测等,除此之外,还包括:
1、基因扩增;
2、扩增特异性分析;
3、基因定量分析;
4、基因检测;
5、基因分型;
6、SNP分析;
7、RFLP多态性分析;
8、单/多基因表达研究;
9、高通量基因表达谱研究等。
大量的荧光定量PCR研究资料表明,病原体数量与感染性疾病病情的轻重程度、传染性及治疗效果均有相关性。因此,通过荧光定量PCR方法得到的检测结果,一定程度上可以准确反映疾病感染的情况。