RIP技术主要是运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行q-PCR验证或者测序分析。RIP是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，可以帮助我们发现miRNA的调节靶点。根据需求，金开瑞可以提供RNA/蛋白、RNA/RNA互作验证RIP技术服务。
应用：
1.用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白；
2.防止非特异性的RNA的结合；
3.免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来；
4.结合的RNA序列通过定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。
RIP实验流程：
(一)细胞裂解液获取
A.单层细胞或者贴壁细胞处理
1.冷PBS清洗培养皿或培养瓶中的细胞两次
2.加入冷PBS后用细胞刮将细胞刮下来，收集至enpendoff管
3.1500rpm，4℃离心5min，弃上清，收集细胞
4.用与细胞等体积的RIP裂解液重悬细胞，吹打均匀后于冰上静置5min
5.每管分装200ul细胞裂解液，贮存于-80℃
B.悬浮细胞处理：先收集细胞再计数，然后清洗裂解
C.组织样品处理
1.冷PBS清洗新鲜切下的组织三次
2.加入冷PBS后，用匀浆器或其他细胞分离设备使组织分散为单个细胞，计数
3.1500rpm，4℃离心5min，弃上清，收集细胞
4.用与细胞等体积的RIP裂解液重悬细胞，吹打均匀后置于冰上静置5min
5.每管分装200ul细胞裂解液，贮存于-80℃
(二)磁珠的准备
A.实验前准备
1、enpendoff管
2、磁力架
3、冰盒，RIPWashBuffer置于冰上
4、抗体，置于冰上
5、涡旋震荡器
6、枪、枪头放于超净台照射30min，枪喷DEPC水
B.磁珠准备过程
1.重悬磁珠
2.标记实验所需的enpendoff管，样品包括目的样品，阴性对照与阳性对照
3.吸取50ul重悬后的磁珠悬液于每个enpendoff管
4.每管加入500ulRIPWashBuffer，涡旋震荡
5.将enpendoff管置于磁力架上，并左右转动15°使磁珠吸附成一条直线，去上清，重复一次
6.用100ul的RIPWashBuffer重悬磁珠，加入约5ug相应抗体于每个样品中
7.室温孵育30min
8.将enpendoff管置于磁力架上，弃上清
9.加入500ulRIPWashBuffer，涡旋震荡后弃上清，重复一次
10.加入500ulRIPWashBuffer，涡旋震荡后置于冰上
