细胞与低剂量的药物长期接触,引起细胞本身药物化学过程的改变,细胞膜上出现Pgp糖蛋白,使细胞逐渐对药物耐受,随着药物浓度的递增,其耐受程度逐渐加强。
耐药细胞株基本共性:
1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质及糖被构成的生物膜,即细胞膜。
2、所有的细胞都含有两种核酸:即DNA与RNA。
3、作为遗传信息复制与转录的载体。
4、作为蛋白质合成的机器—核糖体,毫无例外地存在于一切细胞内,核糖体,是蛋白质合成的机器,在细胞遗传信息流的传递中起重要作用。
5、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。
6、能进行自我增殖和遗传
7、新陈代谢
8、细胞都具有运动性,包括细胞自身的运动和细胞内部的物质运动
耐药细胞株操作流程:
1、载体构建:将外源基因构建到合适的载体上,如需病毒转染,则包装病毒。
2、筛选浓度测定:以14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
3、细胞接种:转染实验前天接种细胞,各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和 细胞形状而定。
4、细胞转染:用构建好的载体(或包装好的病毒)转染目的细胞。
5、抗生素筛选。
6、鉴定筛选结果。