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分享细胞系的培养步骤
更新时间:2022-09-27 点击次数:731次
  细胞系是来自多细胞生物体的细胞群体,其通常不会无限增殖,但是由于突变,逃避了正常细胞的衰老,从而可以持续分裂的一种细胞的集合。
 
  因此,细胞可以在体外长时间生长。细胞系是研究多细胞生物体的生物化学和细胞生物学的非常重要的工具,例如信号通路、肿瘤杀伤、细胞增殖、细胞周期、突变分析、基因表达、蛋白表达、细胞分化等等。此外,永生化的细胞系也已经在生物技术中得到应用,比如建立新来源、新突变的细胞系。
 
  培养步骤:
 
  1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
 
  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
 
  1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
 
  1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
 
  2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的*培养基终止消化。
 
  3.轻轻吹打细胞,*脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
 
  4.按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。
 
  PS:若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作;将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右*培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度:若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存。若密度超过80%,可直接进行传代(方法同上)。
 
  2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
 
  方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
  方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
  3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入血清及DMSO,冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
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