耐药细胞株在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
 

　　细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞易受损的-5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。
 

　　耐药细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标记的细胞，称为细胞株。一般认为细胞系是通过单细胞分离培养，或者通过筛选，由单细胞增殖形成的细胞群。在整个培养过程中必须始终存在细胞株的特殊特性或标记。建立耐药细胞株主要有两种方法：药物浓度递增法和大剂量药物冲击法。
 

　　1、药物浓度递增法
 

　　其优点是诱导耐药细胞药物剂量逐步增加，细胞培养环境逐渐改变，细胞耐受性较好，状态较好，但诱导耐药过程耗时较长，且化疗药物的作用方式与临床常用的大剂量短疗程化疗原则有一定差异；
 

　　2、药物大剂量冲击法
 

　　其优点是类似于临床常用的大剂量化疗药物冲击疗法，但其缺点是药物浓度较高，细胞培养可能因外环境突变而耐受，细胞状态难以控制，耐药能不稳定。